Компетентные клетки и векторы для клонирования

Компетентные клетки и векторы для клонирования

В современной молекулярной биологии успех эксперимента начинается задолго до постановки реакции ПЦР или запуска секвенатора. Фундамент всех исследований в области генетической инженерии, синтетической биологии и экспрессии рекомбинантных белков закладывается на этапе конструирования рекомбинантных молекул ДНК. От того, насколько эффективно и точно произойдет встраивание целевого гена в транспортную плазмиду, напрямую зависит чистота эксперимента, выход белка и, в конечном счете, достоверность полученных вами данных.

Компания «Молекулаб» предлагает решения для молекулярного клонирования от Solarbio, Servicebio. Мы понимаем, с какими вызовами сталкиваются научные сотрудники в российских лабораториях: необходимость получать воспроизводимые результаты, экономить время и работать с реактивами, стабильность которых не вызывает сомнений. Поэтому в нашем каталоге представлены только надежные системы — от классических плазмидных векторов до передовых наборов для бесшовного (seamless) клонирования, позволяющие проводить сборку даже самых сложных генетических конструкций.

В данном разделе вы найдете всё необходимое для золотого стандарта клонирования, а также современные инструменты, минимизирующие количество этапов и повышающие выход положительных клонов.

Плазмида pNZ8148 — вектор экспрессии для грамположительных бактерий

При работе с такими хозяйскими штаммами, как Lactococcus lactis или другие молочнокислые бактерии, критически важно использовать вектор, адаптированный к особенностям их репликации и трансляции. Плазмида pNZ8148 представляет собой один из наиболее авторитетных инструментов для индуцибельной экспрессии рекомбинантных белков в грамположительных микроорганизмах .

Данный вектор имеет ряд особенностей, которые делают его незаменимым в лабораториях, специализирующихся на пищевой биотехнологии, ветеринарии и изучении пробиотических штаммов. Вектор несет ген устойчивости к хлорамфениколу и промотор nisA, который строго регулируется системой низинового контроля. Это позволяет вам "включать" экспрессию целевого гена именно в тот момент, когда культура достигла оптимальной плотности, сводя к минимуму метаболическую нагрузку на клетки на этапе роста. Специалисты по клонированию оценят наличие удобного полилинкера (MCS), стартового кодона ATG в составе сайта NcoI и терминатора транскрипции, обеспечивающего стабильность мРНК. Плазмида поставляется в виде готового штамма, что гарантирует высокое качество препаративной ДНК для ваших задач.

Набор для нулевого клонирования pSWE-Topo — мгновенное лигирование с "нулевым" фоном

Одним из самых трудоемких этапов классического клонирования является борьба с фоном самолигированного вектора. Набор pSWE-Topo (Zero Background) решает эту проблему кардинально, используя инновационную технологию суицидного гена.

Вектор в составе набора сконструирован на основе pUC19 и содержит токсичный ген, нарушение рамки считывания которого происходит только при успешной встройке целевого фрагмента . Если вставка не произошла, вектор остается "открытым" и экспрессирует токсичный белок, убивая клетки-хозяева. Таким образом, вы получаете практически нулевой фон — 95% выросших колоний содержат рекомбинантную плазмиду. Это избавляет от необходимости проводить дорогостоящий и времязатратный сине-белый скрининг (Blue-white screening).

Кроме того, набор совместим как с TA-клонированием (если вы использовали Taq-полимеразу), так и с клонированием фрагментов с тупыми концами. Реакция лигирования занимает всего 5 минут при комнатной температуре и не требует использования ДНК-лигазы. Это идеальное решение для рутинного клонирования продуктов ПЦР, секвенирования и создания геномных библиотек.

Системы для клонирования In-Fusion — бесшовная сборка без рестрикционных сайтов

Традиционное клонирование с использованием рестриктаз и лигазы часто ограничено доступными сайтами рестрикции. Технология In-Fusion совершила революцию, позволив встраивать фрагменты ДНК в любые участки вектора независимо от наличия сайтов. Мы предлагаем два варианта смесей для клонирования, чтобы вы могли выбрать оптимальный под сложность ваших конструкций .

Смесь для клонирования In-Fusion Cloning Mix (2-кратная)
Это базовый и высокоэффективный инструмент для направленного клонирования одного или нескольких (до 2-3) фрагментов. В основе метода лежит распознавание гомологичных концов длиной 15 п.н., которые вводятся в состав праймеров. Премикс содержит все необходимые компоненты для ферментативной обработки и рекомбинации, что позволяет обойтись без термостатирования на этапе лигирования. Доля положительных клонов при встраивании одного фрагмента достигает 99% .

Смесь для клонирования In-Fusion Cloning Mix Plus (2-кратная)
Если ваши задачи включают сборку сложных мультигенных кассет или одновременное встраивание от 2 до 5 фрагментов, версия Plus станет вашим выбором. Данная смесь является улучшенной версией предыдущей и специально оптимизирована для мультифрагментарной сборки. Благодаря модифицированному ферментативному составу и оптимизированному буферу, эффективность клонирования сохраняется высокой даже при сборке конструкций из нескольких частей. Это незаменимый помощник при создании мультицистронных векторов, нокаутных кассет и CRISPR-конструкций .

Для обеих версий смесей доступны фасовки на 20 и 100 реакций, что позволяет гибко планировать бюджет и расход реактивов в зависимости от интенсивности работы лаборатории.

Обращаясь в «Молекулаб», вы получаете не просто расходные материалы, а проверенные технологические решения. Мы гарантируем стабильность температурных режимов хранения при транспортировке по России, поэтому каждая партия реактивов поступает к вам в идеальном состоянии. Доверьте молекулярное клонирование надежным инструментам и сосредоточьтесь на большой науке.