Смесь для клонирования In-Fusion Cloning Mix 2-кратная, 100 реакций

Смесь для клонирования In-Fusion Cloning Mix 2-кратная может быстро лигировать одиночный или 2~ 3 множественных фрагмента в вектор и клонировать в вектор, особенно подходящая для лигирования одного фрагмента, и эффективность лигирования 2-3 фрагментов будет снижена. Его принцип заключается в том, чтобы сначала линеаризовать вектор, а затем ввести конечную последовательность линеаризованного вектора в 5'-конец праймера прямой/обратной амплификации фрагмента ДНК, вставленного в линеаризованный вектор, так что каждый из 5'- и 3'-концов продукта ПЦР-амплификации имеет последовательность (15-25 п.н.) идентично концу линеаризованного вектора. В мастер-миксе для клонирования 2×In-Fusion необходимо смешать продукт ПЦР и линеаризованный вектор с последовательностями, соответствующими концам линеаризованного вектора, в определенной пропорции, а затем инкубировать его на льду (или в смеси ледяной воды) в течение 5 минут. Затем может быть выполнена трансформация компетентных клеток и осуществлено направленное клонирование.

Этот премикс позволяет осуществлять эффективное и быстрое бесшовное клонирование ДНК и может быть использован для конструирования рекомбинантных плазмид или рекомбинантных плазмид с точечной мутацией гена. Этот премикс не зависит от лигазной системы, что значительно снижает фон самолигирования вектора, и в нем не нужно учитывать сайт эндонуклеазы рестрикции, содержащийся в самом вставленном фрагменте. При конструировании односегментных ДНК-рекомбинантных плазмид доля положительных клонов, полученных с использованием этой мастер-смеси, достигает 99%. При использовании этого раствора для премикса он не зависит от оборудования с постоянной температурой и может выполнять все операции от подготовки образцов ДНК до посева культуры рекомбинантных продуктов в течение нескольких часов, что значительно экономит время.