Реагенты для транскрипции и обратной транскрипции: от РНК к знаниям
Обратная транскрипция — это фундаментальный процесс в современной молекулярной биологии, открывающий окно в мир РНК. Будь то изучение экспрессии генов, обнаружение РНК-содержащих вирусов, создание библиотек кДНК или анализ некодирующих РНК — качество и надежность полученных данных напрямую зависят от эффективности первого и самого критического этапа: синтеза комплементарной ДНК (кДНК) на матрице РНК.
Раздел «Реагенты для транскрипции и обратной транскрипции» каталога «Молекулаб» представляет исчерпывающий ассортимент ферментов и наборов от ведущих мировых производителей (Thermo Fisher Scientific, TransGen Biotech, Servicebio, Himedia, Solarbio). Здесь вы найдете решения для всех возможных задач: от рутинной ОТ-ПЦР до высокоспециализированного анализа микроРНК и синтеза кДНК со сложных вторичных структур.
Ключевые компоненты: понимание ферментов
В основе любого эксперимента по обратной транскрипции лежит фермент — обратная транскриптаза (ОТ, ревертаза). Представленные в каталоге ферменты различаются по происхождению, модификациям и свойствам:
1. Обратные транскриптазы на основе M-MLV (вирус лейкоза мышей Мулони)
Это наиболее популярный класс ревертаз, характеризующийся высокой точностью и надежностью.
2. Специализированные ферменты
-
Анти-ингибиторная высокотемпературная ОТ TransScript IV (TransGen): Версия, оптимизированная для работы с образцами, содержащими ингибиторы обратной транскрипции (например, гуанидин, фенол, этанол). Незаменима при работе со сложными клиническими образцами или субоптимально очищенной РНК.
-
Обратная транскриптаза TransScript IV с пометкой "10000 ед": Чистый фермент для исследователей, предпочитающих собирать реакционные смеси самостоятельно, без использования готовых наборов. Позволяет гибко настраивать состав реакций.
Наборы для обратной транскрипции: комплексные решения
Помимо отдельных ферментов, в разделе широко представлены готовые наборы (коктейли), включающие все необходимые компоненты: обратную транскриптазу, ингибитор РНКаз, случайные праймеры (random hexamers), олиго(dT)18, смесь dNTPs, буфер и DTT.
1. Универсальные наборы для синтеза первой цепи кДНК
-
SweScript RT I / RT II First Strand cDNA Synthesis Kit (Servicebio): Наборы на основе соответствующих ферментов. Включают все компоненты для синтеза кДНК с последующим использованием в ПЦР. Доступны в фасовках на 50 и 100 реакций.
-
Набор Maxima H Minus для синтеза кДНК на основе первой цепи (Thermo Fisher): Премиальный набор на основе высокотемпературной РНКаза H- минус ревертазы. Обеспечивает максимальный выход полноразмерной кДНК для самых требовательных приложений .
-
Набор для обратной транскрипции к ДНК (Himedia/Servicebio): Базовый набор для рутинных задач.
2. Наборы с удалением геномной ДНК (gDNA removal)
Контаминация геномной ДНК в препаратах РНК — частая проблема, ведущая к ложноположительным результатам в количественной ПЦР. Специализированные наборы включают этап обработки ДНКазой I или специальные спин-колонки для удаления геномной ДНК перед обратной транскрипцией.
-
SweScript RT II / RT I First Strand cDNA Synthesis Kit with gDNA Remover (Servicebio): Наборы "2 в 1", которые включают реагент для эффективного удаления следов геномной ДНК без повреждения РНК. Идеальны для прецизионной qPCR.
-
Набор для синтеза первой цепи кДНК для кПЦР SweScript (Servicebio): Специализированный набор, оптимизированный для последующего количественного анализа. Обеспечивает максимальную чувствительность и линейность детекции редких транскриптов.
3. Наборы для работы с микроРНК (miRNA)
МикроРНК — это класс коротких некодирующих РНК (около 22 нуклеотидов), которые не имеют поли(А)-хвоста. Стандартные протоколы с олиго(dT) для них не работают.
-
Набор для синтеза кДНК по микроРНК TaqMan Advanced (Thermo Fisher): Инновационная технология, которая использует многоступенчатый процесс (полиаденилирование, удлинение адаптера, универсальная амплификация) для создания кДНК из зрелых микроРНК. Обеспечивает высочайшую специфичность и чувствительность для последующей детекции методом qPCR .
-
Набор для анализа микроРНК TaqMan (250 реакций) (Thermo Fisher): Комплексное решение, включающее не только реагенты для обратной транскрипции, но и оптимизированные праймеры/зонды для детекции конкретных мишеней микроРНК методом TaqMan qPCR.
Вспомогательные ферменты и реагенты
Для полноценной работы с нуклеиновыми кислотами в разделе также представлены важные вспомогательные ферменты:
-
Щелочная фосфатаза (FastAP, термочувствительная) (Thermo Fisher) и Фосфатаза щелочная (CAS 9001-78-9): Фермент, удаляющий 5'- и 3'-фосфатные группы с ДНК, РНК и нуклеотидов. Применяется для дефосфорилирования векторов перед лигированием (предотвращает рециркуляризацию), удаления dNTPs перед секвенированием и в других протоколах. FastAP — термочувствительная версия, которая легко инактивируется нагреванием (что упрощает очистку).
-
Пирофосфатаза PPase (Thermostable), неорганическая: Фермент, гидролизующий неорганический пирофосфат (PPi), побочный продукт синтеза нуклеиновых кислот. Используется в секвенировании (пиросеквенирование) и в препаративном синтезе РНК/ДНК для смещения равновесия реакции в сторону образования продукта и предотвращения ингибирования.
Критерии выбора: как подобрать идеальный реагент?
|
Ваша задача
|
Рекомендуемый продукт
|
Ключевое преимущество
|
|
Рутинная ОТ-ПЦР (проверка экспрессии, скрининг)
|
EasyScript, SweScript RT I, Набор для обратной транскрипции к ДНК
|
Надежность и экономическая эффективность
|
|
Количественная ПЦР (qPCR) высокая точность
|
SweScript RT II with gDNA remover, Maxima H Minus, Набор для кПЦР SweScript
|
Удаление геномной ДНК, высокая чувствительность
|
|
Длинные транскрипты, ГЦ-богатые районы, сложные структуры
|
TransScript IV [РНКаза H-], TransScript Uni, SweScript RT II, Maxima H Minus
|
Высокотемпературный синтез, отсутствие РНКазы H активности
|
|
Клонирование, создание библиотек кДНК
|
Maxima H Minus, TransScript IV
|
Максимальная длина и полноразмерность кДНК
|
|
Анализ микроРНК (miRNA)
|
TaqMan Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit, TaqMan MicroRNA Assay
|
Специализированная технология для коротких РНК
|
|
Работа с ингибиторами или сложными образцами
|
TransScript IV Anti-Inhibitor
|
Устойчивость к контаминантам
|
|
Дефосфорилирование, подготовка векторов
|
FastAP, Щелочная фосфатаза
|
Простота инактивации, универсальность
|
Рекомендации для исследователей
-
Выбор праймеров: Наборы обычно включают смесь олиго(dT) и случайных гексамеров. Олиго(dT) идеальны для матриц с поли(А)-хвостом (мРНК эукариот). Случайные гексамеры лучше подходят для РНК прокариот, рРНК, тРНК или фрагментированной РНК, так как инициируют синтез по всей длине транскрипта.
-
Удаление геномной ДНК: Для qPCR всегда используйте наборы с этапом удаления гДНК. Это критически важно для достоверности результатов.
-
Контроль РНКаз: При работе с чистыми ферментами (без ингибитора РНКаз в составе) обязательно добавляйте ингибитор РНКаз (RNase Inhibitor) в реакционную смесь для защиты матрицы.
Изучите представленные в разделе реагенты. Если у вас возникнут вопросы по выбору оптимального фермента или набора для вашей конкретной задачи — обратитесь к нашим специалистам. Мы поможем найти решение, которое обеспечит чистоту, полноту и достоверность ваших результатов.
ELK1859-96T
18080093
4368814
AW311-03
K1652
EF0652
A28007
A25576![Обратная транскриптаза анти-ингибиторная высокотемп. ОТ TransScript IV [M-MLV, РНКаза H-], 10000 ед](/upload/iblock/cef/d1ajxmxza1merkfytwbxa2693g94jxh4.jpg)
AW101-02
AE101-02![Обратная транскриптаза высокотемпературная TransScript Uni [M-MLV, РНКаза H-], 10000 единиц](/upload/iblock/22d/o122em7qfrca4123tc3rkhs2eetwqvsa.jpg)
AU101-02
AT101-03
AH101-02