Фильтр

Мишень

Первичные антитела

Категории

Вид:

Сортировать по:По

1
1680
1681
1682
2153

О разделе

Первичные антитела используют для выявления белков, определения их локализации, оценки экспрессии и исследования посттрансляционных модификаций. Результат зависит от соответствия антитела конкретной мишени, виду образца и условиям эксперимента: реагент, подходящий для денатурированного белка в вестерн-блоттинге, не обязательно распознаёт тот же антиген в фиксированной ткани или в нативном белковом комплексе.

Подробнее о разделеСвернуть описание

Первичные антитела для исследования белков, клеток и тканей

В каталоге Молекулаб представлены первичные антитела Servicebio, Solarbio, ABclonal, Thermo Fisher Scientific, Merck, TransGen и Zymo Research. Ассортимент включает моноклональные и поликлональные антитела, рекомбинантные варианты и контрольные иммуноглобулины. Подбор выполняют по антигену, видовой реактивности, хозяину, клону, изотипу и подтверждённым методам применения.

Антитела к белковым меткам и рекомбинантным белкам

Антитела к эпитопным меткам применяют для детекции экспрессируемых конструкций и меченых белков. В разделе представлены реагенты к EGFP, Flag Tag, HA Tag и His Tag, в том числе:

Servicebio GB12602-100UL — моноклональные мышиные антитела к EGFP.
Servicebio GB11602-100UL — поликлональные кроличьи антитела к EGFP.
Servicebio GB11938-100UL — поликлональные кроличьи антитела к Flag Tag.
Servicebio GB12939-100UL — моноклональные мышиные антитела к HA Tag.
Servicebio GB111251-100UL — поликлональные кроличьи антитела к His Tag.

При выборе учитывают последовательность и расположение метки, доступность эпитопа, состав конструкции и способ подготовки образца. Для иммунопреципитации необходимо подтверждение работы антитела с нативным белком; данных только по WB для этого недостаточно.

Наличие вариантов от разных хозяев позволяет согласовать детекцию метки с остальными антителами в эксперименте и подобрать совместимые вторичные реагенты.

Антитела к GAPDH и β-Actin

В каталоге доступны антитела к белкам, которые часто используют при оценке загрузки образцов и исследовании клеточных процессов. Среди них — Servicebio GB15002-100UL, рекомбинантные моноклональные антитела к GAPDH, и Solarbio K200058M-100UL, моноклональные антитела к β-Actin.

Выбор белка для нормализации требует проверки в конкретной модели. Экспрессия GAPDH или β-Actin может изменяться под действием экспериментальных условий, поэтому использовать их как неизменный внутренний контроль без предварительной оценки некорректно.

Для количественного вестерн-блоттинга важно подтвердить стабильность выбранного контрольного белка и отсутствие насыщения сигнала. При необходимости рассматривают нормализацию по общему белку.

Антитела к маркерам пролиферации, аутофагии и сигнальным белкам

Ассортимент включает антитела к Ki67, SQSTM1/p62, NF-κB p65, Histone H3 и другим мишеням. Например, в разделе представлены:

Servicebio GB121141-100UL — моноклональные мышиные антитела к Ki67.
Servicebio GB11239-1-100UL — поликлональные антитела к SQSTM1/p62.
Servicebio GB11997-100UL — поликлональные антитела к NF-κB p65.
Servicebio GB11102-100UL — поликлональные антитела к Histone H3.

При подборе необходимо различать детекцию общего белка и его определённого состояния. Антитело к общему белку не заменяет реагент, специфичный к фосфорилированному участку, продукту расщепления или отдельной изоформе.

Интерпретация также зависит от задачи. Изменение интенсивности окрашивания, перераспределение белка между клеточными компартментами и изменение его общего содержания — разные наблюдения, для которых могут потребоваться разные протоколы и контрольные образцы.

Моноклональные, поликлональные и рекомбинантные антитела

Моноклональные антитела распознают определённый эпитоп. При сравнении реагентов к одной мишени важно учитывать клон: разные клоны могут по-разному работать после фиксации, антигенной демаскировки или денатурации белка.

Поликлональные антитела представляют собой смесь иммуноглобулинов к нескольким эпитопам антигена. Такой формат может быть полезен при неоднородной доступности эпитопов, но требует оценки фонового окрашивания и воспроизводимости между партиями.

Рекомбинантное производство описывает способ получения антитела. Оно позволяет воспроизводить заданную последовательность, однако само по себе не подтверждает пригодность реагента для любого метода. При выборе рекомбинантного антитела также оценивают данные по специфичности и валидации.

Универсально лучшего формата нет: выбор определяется образцом, задачей и качеством экспериментальных данных для конкретного артикула.

Как выбрать первичное антитело по мишени и видовой реактивности

Перед заказом уточняют название белка, его синонимы, идентификатор гена или белковой последовательности. Это помогает различать близкие по названию мишени, изоформы и гомологичные белки одного семейства.

Необходимо отдельно проверить:

Видовую реактивность: для каких организмов показано распознавание мишени.
Иммуноген и эпитоп: к какому участку белка получено антитело, если эта информация раскрыта производителем.
Специфичность к модификации: требуется ли выявление общего белка или определённого модифицированного участка.
Хозяина и изотип: эти характеристики определяют выбор вторичного антитела и совместимость с другими реагентами.
Клон: особенно при воспроизведении опубликованного протокола или продолжении длительной серии экспериментов.

Хозяин антитела и видовая реактивность — разные параметры. Например, кроличье антитело может распознавать белок человека, мыши или крысы. При этом для его непрямой детекции требуется вторичное антитело против иммуноглобулинов кролика.

Подбор антител для вестерн-блоттинга

Для WB выбирают реагент с подтверждённой работой в условиях соответствующей подготовки образца. Важны восстановление дисульфидных связей, денатурация, способ выделения белка и наличие протеолитического расщепления.

Ожидаемую молекулярную массу оценивают с учётом изоформ, созревания белка и посттрансляционных модификаций. Полоса в ожидаемой области поддерживает интерпретацию результата, но сама по себе не доказывает специфичность антитела.

Рабочее разведение оптимизируют вместе с количеством нанесённого белка, условиями блокировки, промывки и регистрации. Для сравнения экспрессии необходимо сохранять сигнал в диапазоне, пригодном для количественной оценки.

Первичные антитела для IHC и ICC/IF

В иммуногистохимии и иммунофлуоресценции результат зависит от сохранности и доступности эпитопа. При выборе учитывают тип материала, фиксатор, продолжительность фиксации, условия пермеабилизации и антигенной демаскировки.

Подтверждённая работа на парафиновых срезах не означает автоматическую пригодность для замороженных срезов или клеточных культур. Аналогично данные по клеточной иммунофлуоресценции не заменяют валидацию на тканях.

Для многоцветного окрашивания заранее согласуют хозяев первичных антител, специфичность вторичных реагентов и спектральные характеристики меток. Использование нескольких первичных антител одного вида требует специально разработанной схемы их раздельной детекции.

Антитела для проточной цитометрии, ELISA и иммунопреципитации

В проточной цитометрии учитывают локализацию антигена и доступность эпитопа на интактных клетках либо после фиксации и пермеабилизации. Дополнительно проверяют совместимость реагента с выбранной системой флуоресцентной регистрации.

Для ELISA важно назначение антитела в схеме анализа. В сэндвич-формате захватывающее и детектирующее антитела должны совместно распознавать антиген, не препятствуя связыванию друг друга. Два антитела к одному белку не обязательно образуют рабочую пару.

Для иммунопреципитации требуется способность связывать мишень в условиях выделения и сохранения белкового комплекса. При последующем WB учитывают возможный сигнал от тяжёлых и лёгких цепей иммуноглобулинов.

Для каждого из этих методов ориентируются на подтверждённые применения конкретного продукта, а не только на название антигена.

Валидация, контрольные образцы и воспроизводимость

При оценке антитела полезны положительные и отрицательные образцы, данные о клеточной локализации мишени и сравнение с независимыми способами её определения. Если доступны модели с нокаутом или снижением экспрессии целевого гена, их используют для дополнительной проверки специфичности в выбранном методе.

Контроль без первичного антитела позволяет оценить вклад системы детекции. Контрольный иммуноглобулин помогает исследовать отдельные источники неспецифического связывания, но не заменяет биологический отрицательный контроль и не доказывает специфичность основного реагента.

Для воспроизводимости фиксируют артикул, клон, номер партии, концентрацию или разведение, время инкубации и параметры подготовки образца. При смене партии или производителя целесообразно сравнить результаты на одинаковом контрольном материале.

Фасовка, хранение и заказ первичных антител

Фасовку выбирают с учётом концентрации реагента, рабочего разведения и расхода на одну постановку. Одинаковый объём двух продуктов не означает одинаковое количество доступных экспериментов.

Условия хранения, допустимость замораживания и необходимость аликвотирования определяют по документации производителя. При планировании прямого мечения или иммобилизации дополнительно проверяют состав буфера, наличие белков-носителей и консервантов.

В каталоге Молекулаб можно подобрать первичные антитела по мишени и характеристикам продукта. Для уточнения совместимости укажите антиген, вид и тип образца, метод исследования, условия фиксации или лизиса, а также желаемый формат детекции. Если требуется воспроизвести существующий протокол, приложите артикул, клон или ссылку на публикацию.

Основные товары (0)

Инновации для лабораторий, доступные в один клик

Производитель

Тип антител

Хозяин

Вид антител

Конъюгат

Метод

Мишень

Первичные антитела

О разделе

Первичные антитела для исследования белков, клеток и тканей

Антитела к белковым меткам и рекомбинантным белкам

Антитела к GAPDH и β-Actin

Антитела к маркерам пролиферации, аутофагии и сигнальным белкам

Моноклональные, поликлональные и рекомбинантные антитела

Как выбрать первичное антитело по мишени и видовой реактивности

Подбор антител для вестерн-блоттинга

Первичные антитела для IHC и ICC/IF

Антитела для проточной цитометрии, ELISA и иммунопреципитации

Валидация, контрольные образцы и воспроизводимость

Фасовка, хранение и заказ первичных антител

Возможно, вам понравится

О разделе

Первичные антитела для исследования белков, клеток и тканей

Антитела к белковым меткам и рекомбинантным белкам

Антитела к GAPDH и β-Actin

Антитела к маркерам пролиферации, аутофагии и сигнальным белкам

Моноклональные, поликлональные и рекомбинантные антитела

Как выбрать первичное антитело по мишени и видовой реактивности

Подбор антител для вестерн-блоттинга

Первичные антитела для IHC и ICC/IF

Антитела для проточной цитометрии, ELISA и иммунопреципитации

Валидация, контрольные образцы и воспроизводимость

Фасовка, хранение и заказ первичных антител

Каталог товаров